1、什麽是定标(生(shēng)化儀測定原理(lǐ))朗伯-比爾定律是生(shēng)化儀的理(lǐ)論基礎，樣本+試劑進行(xíng)反應，測得(de)的是吸光度(A)，需要轉化成濃度(或者活力單位)才有(yǒu)臨床意義。因此需要建立濃度(或活力單位)和(hé)吸光度之間(jiān)的關系。定标，即測定已知濃度(或活力單位)的校(xiào)準品，根據生(shēng)化儀測得(de)的吸光度，進行(xíng)拟合，得(de)到濃度和(hé)吸光度之間(jiān)的關系曲線---校(xiào)準曲線，将樣本+試劑反應的吸光度帶入校(xiào)準曲線，就可(kě)以得(de)到濃度。(如下圖所示)

　　2、生(shēng)化試劑的相關基礎(上(shàng)機要點)參數(shù)設置內(nèi)容：波長(主副波長)，反應時(shí)間(jiān)、樣品量、試劑量、讀點時(shí)間(jiān)、反應方向、分析方法、校(xiào)準方法、校(xiào)準濃度等。3、生(shēng)化反應的監測根據反應類型的不同，曲線被分為(wèi)反應曲線、校(xiào)準曲線等。(下圖是反應曲線示例)

　　反應曲線的縱坐(zuò)标為(wèi)吸光度值，橫坐(zuò)标為(wèi)反應時(shí)間(jiān)。反應時(shí)間(jiān)即測光點，當一個(gè)反應杯通(tōng)過一次光度計(jì)光路時(shí)，就會(huì)被測定一次吸光度，兩次通(tōng)過光路的間(jiān)隔就是一次讀點時(shí)間(jiān)，也可(kě)以說反應盤旋轉一圈所用的時(shí)間(jiān)。反應曲線是反應監測的主要信息內(nèi)容。在反應曲線上(shàng)能看到樣品、試劑加入時(shí)的時(shí)間(jiān)、對應吸光度。除反應曲線監測外，平時(shí)還(hái)有(yǒu)試劑空(kōng)白監測，查看試劑空(kōng)白吸光度。校(xiào)準曲線是反映校(xiào)準的過程，并為(wèi)計(jì)算(suàn)結果提供依據。校(xiào)準曲線根據校(xiào)準方法分為(wèi)線性曲線和(hé)非線性曲線兩種;根據校(xiào)準點的多(duō)少(shǎo)分為(wèi)單點線性曲線和(hé)多(duō)點線性非線性曲線。(下圖是校(xiào)準曲線)

　　校(xiào)準曲線的縱坐(zuò)标是吸光度軸，橫坐(zuò)标是濃度軸。線性曲線有(yǒu)一點或多(duō)點，過零點和(hé)不過零點多(duō)種。非線性曲線一般都是多(duō)點，有(yǒu)樣條曲線(Spline)、對數(shù)曲線(Logit-Log3P、Logit-Log4P、Logit-Log5P)、函數(shù)曲線、折線曲線等。在參數(shù)正确的情況下，校(xiào)準曲線的每個(gè)點是校(xiào)準品和(hé)相應試劑反應後的結果。校(xiào)準曲線結果與校(xiào)準方法的選擇，會(huì)直接影(yǐng)響結果的準确和(hé)穩定。4、定标影(yǐng)響因素①重複性不好校(xiào)準品沒有(yǒu)混勻或者試劑穩定性較差，可(kě)通(tōng)過精密度實驗排查原因。②校(xiào)準類型根據校(xiào)準品濃度和(hé)吸光度之間(jiān)呈現的關系，選擇合适的校(xiào)準類型。如果校(xiào)準品濃度和(hé)吸光度呈線性關系，則不建議使用樣條函數(shù)拟合;Logit雙對數(shù)函數(shù)3P、4P、5P，雖然都是“收斂型”函數(shù)，但(dàn)是收斂程度不一樣，根據收斂程度确定合适的雙對數(shù)函數(shù)校(xiào)準類型。③校(xiào)準品濃度校(xiào)準品濃度如果設置不合理(lǐ)，有(yǒu)可(kě)能拟合結果較差，導緻點不在校(xiào)準曲線上(shàng)，定标回測較差。